邻位连接分析(Proximity Ligation Assay, PLA)是近几年建立的一种可以用于研究蛋白质定位、相互作用、修饰以及功能的蛋白质体外分析技术。其作用原理的基础是一对标记了寡核苷酸的抗体：依照实验目标的不同，可以选择共同辨认目标蛋白上不同抗原区、两个可能相互作用的蛋白区块，抑或是目标蛋白的修饰添加物; 而标记在抗体上的寡核苷酸则是选用能与之后加入的连接寡核苷酸 (connector oligos) 配对的序列。
 

以GeneTex的新产品SARS-CoV-2 Membrane Protein Proximity Ligation Assay (PLA) Kit (Cy3) (GTX537371-23) 为例说明：当两个抗体对新冠病毒膜蛋白形成双重辨认，且距离足够靠近彼此时 (<40nm) (上图步骤A)，抗体上的寡核苷酸会与连接寡核苷酸配对并形成环状单链 DNA (步骤B与C)。此环状单链DNA通过设计在寡核苷酸上的启动子片段以及试剂中的 DNA 聚合酶进行滚环扩增 (Rolling Circle Amplification, RCA) (步骤D)，在原位不断地制造DNA长链。经过此扩增步骤，即便细胞感染的病毒量极低，病毒膜蛋白的讯号也能增幅千倍以上。优异的灵敏度与专一性使得 PLA 技术被视为是相当具有价值的研究与诊断工具。
 

GeneTex的 PLA 试剂除了可以应用于新冠病毒感染组织的膜蛋白侦测之外，也适用于被感染的细胞或是膜蛋白转染细胞。如上文所述，透过 RCA 扩增后的 DNA 长链带有多处特殊序列 (上图中黄色片段)，能够被 Cy3 荧光分子探针标定。因此，使用者可以轻易地使用荧光显微镜观察并撷取所需的视野，可说是相当地便利 (步骤E)。
 

GeneTex 有许多经充分验证的抗体与试剂。为推动基础科学与临床研究，近几年来积极投入开发传染性疾病研究领域的抗体、蛋白与试剂。欲了解 GeneTex 新冠病毒或其他研究领域的相关产品，请造访我们的网站www.genetex.com以获取更多信息。

 

重点产品

 

邻位连接分析优势

• 侦测内源性蛋白
• 蛋白与蛋白作用可视化
• 蛋白质翻译后修饰可视化
• 高度专一性
• 单一分子灵敏度

 

SARS-CoV-2 Membrane Protein Proximity Ligation Assay (PLA) Kit (Cy3) (GTX537371-23)

利用PLA试剂检测转染后的HEK293T 細胞 (SARS-CoV-2 (COVID-19) Membrane FFPE 293T cell pellet Block, GTX435645)。陽性邻位连接分析讯号以黄色荧光呈现，细胞核则以蓝色荧光呈现。

图A: 于病毒膜蛋白转染的HEK293T细胞中测得阳性讯号
图B: 阴性对照组: 模拟测试转染的HEK293T细胞
图C: 阴性对照组: 使用非专一性寡核苷酸标定之抗体检测病毒膜蛋白转染的HEK293T细胞

 

PLA实验攻略下载

 

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