新学期新实验 IHC 怎么做？
2146 人阅读发布时间：2018-03-26 15:49
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| 新学期新实验 IHC 怎么做? |
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免疫组织化学（IHC）是根据抗原及抗体间专一性的结合反应，检测组织切片中的抗原（如蛋白），进行组织定性和定位分析的一种技术。虽然相较于 WB 及 ELISA 等分析方法而言其定量功能较低，但利用 IHC 可以完整观察组织型态与目标抗原相对位置，此点在病理诊断上尤其重要，因此被广泛应用于科研及临床诊断等领域。
IHC 的基本操作技术并不复杂，选择高质量/高特异性的抗体就可以让实验先成功一半，但操作过程中仍有许多小细节会影响实验最终的呈色结果。
GeneTex 身为优质抗体制造商，在验证公司内五万支抗体的过程中累积了极丰富的经验，在此不藏私的与大家分享一些常见的问题，希望可以对读者们提供一些帮助。 |
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| Q：我该如何选择要以哪种方式做切片呢？ |
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A：免疫组织化学 IHC 染色，根据组织切片样本的性质，又可再细分为 IHC-P（石蜡切片）及 IHC-Fr（冰冻切片），各自的优缺点请参照以下对照表格： |
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冰冻切片 IHC-Fr |
石蜡切片 IHC-P |
| 优点 |
保持酶活性与抗原完整性 |
组织型态保存良好 |
| 固定方式 |
包埋前后均可 |
包埋前先固定 |
| 包埋用基质 |
一般常用 OCT 或 Gelatin 包埋 |
利用石蜡包埋 |
| 操作限制 |
冷冻过程中若产生冰晶会影响组织型态 |
容易过度固定 |
| 操作需要仪器 |
冰冻切片机 |
石蜡切片机 |
| 切片厚度 |
较厚（7～15 μm） |
较薄（4～8 μm） |
| 切片保存方式 |
-80 ℃、一年 |
常温、数年 |
| 实验操作时间 |
较短 |
较長 |
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| Q：我该选择荧光二抗，或是酶（HRP、AP）标二抗来做切片的染色呢？ |
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A：不管是石蜡切片或是冰冻切片，只要一抗有保证 IHC-Fr 或是 IHC-P 的应用，则都可以进一步选择利用不同的二抗进行呈色，而常见的呈色方法，可以分为利用酶呈色及利用荧光呈色两种： |
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使用酶标二抗呈色，优点为可放大讯号反应，同时有色的沉淀物有光稳定性，染色完毕之后切片可长期保存。同时，切片的检测仅须利用一般的光学显微镜即可进行观察。
酶呈色的方法，又可依照二抗所接的酶的种类（HRP 或是 AP），选用不同的底物（substrate）来进行反应，生成有色的沉淀。依照色原/底物的不同，可分为下列几种： |
| 酶 |
色原/底物 |
GeneTex 推荐产品 |
颜色 |
优缺点 |
| 辣根过氧
化物酶（HRP） Gt anti-Rb IgG（HRP）
(GTX213110-01) Gt anti-Rb IgG（HRP）
(GTX213111-01) |
AEC |
GTX30938 |
红色 |
容易褪色 |
| DAB |
GTX30939 |
Brown |
色彩持久 |
| TMB-IHC |
GTX30947 |
蓝色 |
色彩持久 |
| 碱性磷酸酶（AP） Gt-anti-Rb IgG（AP）
(GTX26722) Gt-anti-Ms IgG（AP）
(GTX26790) |
BCIP/NBT |
GTX30943 |
蓝到紫色 |
色彩强 |
| Fast Red |
GTX30942 |
红色 |
容易褪色 |
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实验室若有荧光显微镜，就可以利用不同物种的一抗进行染色，观察两种以上的目标抗原在组织中的相对表现位置。
总结以上，使用者可以根据「实验室现有的器材」、「实验需求」、「样品种类」，来选择适合的切片方式（冰冻切片、石蜡切片）或是使用整体染色。进一步再依据「是否有荧光显微镜」、「是否需要观察两种以上的目标抗原表现」、「是否需要放大讯号」来决定要使用哪种二抗进行染色。
GeneTex 免疫组织切片染色成功案例分享！
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| 神经科学领域 |
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NeuN antibody(GTX133127)
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Calbindin antibody(GTX130856)
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](https://res.dxycdn.com/trademd/upload/userfiles/image/2018/03/B1521534648988kz4umj6tfk_small.jpg "NF-H antibody [GT114](GTX634289)") |
| NF-H antibody [GT114](GTX634289)
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