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WB常见问题(四)-3个WB遇扭曲该做的事

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WB常见问题(四)-3个WB遇扭曲该做的事

8088 人阅读发布时间：2020-04-01 15:14

扭曲的线条在艺术上, 可以成为毕卡索扭曲的线条在WB上, 总是让人不好说

解决方案：

a.确保APS & TEMED 正常, 并新鲜配置胶体

APS为起始剂，主要负责提供自由基供胶体进行聚合反应， APS粉末容易受潮，建议置于防潮箱保存，如果发生结块，建议买新的。溶解后的APS溶液，建议分装小量，并存放于-20度，取出后可于4度短暂保存，避免重复冻融，也可避免溶液污染，如胶体聚合不佳，可换一管APS溶液使用，或重新配置新的APS溶液；另外，TEMED为催化剂，如果过期或坏掉，也会影响胶体聚合，建议分装小量，避免溶液因多次取用而污染，APS与TEMED的比例也要根据胶体的浓度或体积进行调整。

b.小心移除齿梳，避免造成凹孔壁歪掉

c.配完下层胶后，需用水或醇类将胶体压平

d.胶里面有杂质/气泡：可预先用0.45 um滤纸过滤胶体溶液，混合胶体溶液时，应避免产生空气。

解决方案：

a.避免用高电压电泳使胶体过热。 150V,过热有雾气, 80-100V，上胶带短下层不匀。

b.空的孔道加sample buffer，使每个孔洞都有样品且盐类成分相近。。

c.孔洞中有杂质，用高纯度等级的化学药品或用商业化试剂提取蛋白样品，也可以在上样前用跑胶缓冲溶液冲洗加样孔。

解决方案：

a.胶跟膜没有密合：轉磨時小心滚压胶体，使胶体与膜确實密合

b.有时出现 2个条带是因为转膜时晃到产生叠影

条带呈哑铃状、骨头状或是长角

出现哑铃最大的可能是胶没有配置好，胶凝固后不均一，拔完梳子之后，某些孔道凸起不平整，可以试着注意胶体是否凝固完全（确认试剂没问题），拔梳子时注意不要让孔道歪掉，loading前也可以再用running buffer冲洗孔道，另外还有一种可能是样品中含有太多杂质，没有离心下来，或没有溶解，然后杂质沉积在孔的中间，蛋白因此被推挤到两边。

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